Hsa

Jul 29, 2023

Scientific Reports volume 12, Artigo número: 11432 (2022) Citar este artigo

900 acessos

3 citações

1 Altmétrico

Detalhes das métricas

Nosso estudo anterior demonstrou o hsa-miR-143-3p como um dos miRNAs altamente expressos em células-tronco epiteliais da córnea enriquecidas (CESCs). Portanto, este estudo visa elucidar o papel regulatório do hsa-miR-143-3p na manutenção do stemness em CESCs. Os genes alvo do hsa-miR-143-3p foram previstos e submetidos à análise da via para selecionar os alvos para estudos funcionais. Células epiteliais límbicas cultivadas primárias foram transfectadas com imitador, inibidor ou sequência codificada hsa-miR-143-3p usando Lipofectamine 3000. As células transfectadas foram analisadas quanto a (i) potencial de formação de colônias, (ii) expressão de marcadores de células-tronco (SC)/ fatores de transcrição (ABCG2, NANOG, OCT4, KLF4, ΔNp63), (iii) marcador de diferenciação (Cx43), (iv) previu cinco alvos de hsa-miR-143-3p (DVL3, MAPK1, MAPK14, KRAS e KAT6A), ( v) reguladores de sinalização MAPK e (vi) reguladores de sinalização Wnt-β-catenina por qPCR, coloração de imunofluorescência e/ou Western blotting. A alta expressão de hsa-miR-143-3p aumentou o potencial de formação de colônias (10,04 ± 1,35%, p < 0,001) com a capacidade de formar colônias semelhantes a holoclones em comparação ao controle (3,33 ± 0,71%). As células tratadas com mimetizador aumentaram a expressão de marcadores SC, mas reduziram a expressão dos alvos Cx43 e hsa-miR-143-3p envolvidos nas vias de sinalização Wnt-β-catenina e MAPK. A expressão de β-catenina, β-catenina ativa e ERK2 em células transfectadas com inibidor hsa-miR-143-3p foi maior que nas células controle e a expressão nuclear localizada indicou a ativação da sinalização Wnt e MAPK. Assim, foi indicada a provável associação do hsa-miR-143-3p na manutenção de CESCs através da inibição das vias de sinalização Wnt e MAPK.

A córnea e o filme lacrimal constituem a janela transparente anterior do olho, que atua como uma barreira física entre o ambiente óptico e o externo. O epitélio da córnea é a camada mais externa da córnea e é regenerado a partir das células-tronco epiteliais da córnea (CESCs) que estão presentes na camada basal do epitélio do limbo1. Essas células-tronco residentes no tecido adulto constituem 3–5% do epitélio limbal total e são normalmente quiescentes. No entanto, a principal função das CESCs é governar processos como a cicatrização de feridas2 e a homeostase3 para manter a transparência da córnea4. O mecanismo molecular por trás da manutenção do stemness nas CESCs ainda não está claro, incluindo a regulação epigenética por microRNAs (miRNAs).

MiRNAs são RNAs de fita simples não codificantes (18 a 24 nucleotídeos) e regulam os níveis de proteína do RNA mensageiro alvo (mRNA) sem qualquer modificação na sequência genética5. Sabe-se que os miRNAs participam ativamente de vários processos celulares como proliferação, diferenciação, metabolismo celular, homeostase e apoptose6,7.

Em nosso estudo anterior, as CESCs foram enriquecidas a 80% usando um protocolo de duas etapas e comparadas com células epiteliais centrais diferenciadas da córnea por sequenciamento de pequeno RNA. Seis miRNAs - hsa-miR-3168, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-143-3p, hsa-miR-150-5p, hsa-miR-10a-5p e hsa-miR-1910-5p foram identificados para ser altamente expresso nos CESCs enriquecidos e validado através de qPCR. Curiosamente, com base na hibridização in-situ do ácido nucleico bloqueado, o hsa-miR-143-3p foi encontrado expresso na camada basal do epitélio limbal, exclusivamente nos aglomerados de pequenas células, indicando sua potencial associação com os CESCs9. Continuando, o papel funcional do hsa-miR-143-3p em CESCs foi avaliado neste estudo.

Nas células-tronco embrionárias de camundongos, o hsa-miR-143-3p promoveu a auto-renovação e aumentou a expressão de genes de pluripotência como OCT4, KLF4 e ESRRB10. Sabe-se também que o Hsa-miR-143-3p regula vários processos celulares como diferenciação11, proliferação12,13, migração14, apoptose15,16 e regulação do ciclo celular17.